无尘无菌车间环境快速测定法

1.无尘无菌车间菌落染色法

在含有氧化还原显色试剂四唑嗡紫罗兰等的琼脂平板培养基上培养微生物，或者在普通的琼脂平板培养基上培养后，经过染色，很容易判别菌落，是一种比标准培养时间更短的计测菌落的方法。

微观染色用于对培养结束的膜过滤器直接滴下染色液，然后让其干燥，将染成青色的菌落拿到10~20倍的放大镜下进行计测。培养时间可以缩短到原来方法的1/2~1/40。例如：大肠菌经过4~6h的培养就可以检测出来。

2.阻抗法

微生物在增殖过程中会将蛋白质、碳水化合物等高分子化合物分解成有机酸、氨基酸等离子化合物，这些离子化合物达到一定浓度，在周围环境中将产生微小的电量变化。将这个电量的变化利用电阻、导电性或者静电容量这些概念检测的方法，称作阻抗法。产生电量变化的时间与开始时的细菌数、菌的增殖性成反比，因此从预先求得的两者的标准曲线中可以推算出样品中初始的细菌数。作为产品化的系统有气压(或液压)传输系统以及细菌计数器。

实际操作如下：向专用容器中添加液体培养基和样品，放在组成系统的培养装置中，开始培养。测定机逐时自动监测培养过程中电量的变化。

本测定方法须培养，但它和原来计测菌落的方法相比，优点在于培养时间可以缩短。培养开始后直到结果的打印输出完全自动化，初投资高但运行费用低，另外通过组合选择性培养基，还可应用于检测特定微生物。

3.氧化电极法

氧化电极法是一种将微生物增殖过程中的呼吸活性，通过氧化电极检出的方法。和阻抗法一样，通过自动监测，随着培养进度逐时地测定，所产生的培养基中溶解氧的浓度，直到能够检出呼吸活性的培养时间，从这一时间推算样品中的开始菌数。

测定时向装有氧化电极的专用容器中添加液体培养基和样品，然后放在组成系统的培养装置中开始培养，测定机自动监测培养基中溶解氧浓度的逐时变化。6h内就可以检出105CFU/g的开始菌数。

4.无尘无菌车间显色法

显色法是一种通过标识色素的色调变化，来检测随微生物代谢产生的培养基pH值的变化和CO₂生成的方法。通过自动监测检测出培养过程中标识色素的色调变化，从直到可以检测出色调变化的这一段培养时间推算出样品中的开始菌数。以培养基pH值变化为指标的维夫斯、以CO₂生成为指标的敏化培养基/生物材料都已产品化。中净环球净化可提供无尘车间、无菌车间的咨询、规划、设计、施工、安装改造等配套服务。

以上4种方法仍需培养，只是培养时间较传统方式缩短，有助于改善生物污染控制的工作效率，属于一类。以下几种方法则无需培养，属于另一类环境微生物快速测定法。

5.荧光染色法

利用荧光染色剂荧光染色细胞膜和细胞核等，使用荧光显微镜等检出方法。染色机理不同的多种荧光染色剂，根据不同的组合也能识别出。染色扫描RDI及D计数、真菌监视器扫描、生物絮凝等都已产品化。

染色扫描RDI在薄膜过滤器上过滤样品，荧光染色被阻挡在薄膜过滤器上的微生物后，再进行激光扫描。荧光染色的30min，激光扫描3min即可结束。其结果可以作为图像表示在监测器画面上，也可以自动计测产生荧光的点数。D计数以及真菌监视器扫描是结合了荧光染色法与流体检查计数法的方法，可以连续测定液态样品。

6.SLP(Silkworm Larvae Plasma)试验法

SLP试验法是利用蚕血液成分检出肽聚糖及β-葡聚糖(多缩葡萄糖)的方法。肽聚糖是细菌的细胞壁成分，β-葡聚糖是真菌的细胞壁成分，因此通过本试验法能够检出这些微生物。不过每个微生物的肽聚糖及β-葡聚糖含量因菌株的不同而差异很大，与LAL试验法一样，不能定量微生物，而且也不能识别出是来源于活菌还是来源于菌。

7.无尘无菌车间ATP(Adenosine Triphos Phate)快速测定法

ATP是高能磷酸化合物，分解时产生的能量用于细胞内各种有能量需求的反应。即ATP在所有活着的细胞内发挥着类似于电池的功能，它的存在成为生命活动的证据。

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