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生物学实验室检测安装验证

作者: 深圳市中净环球净化科技有限公司发表时间:2021-10-25 17:22:32浏览量:1412

生物学实验室检测安装验证 生物制品质量控制中采用的方法包括理化分析方法和生物学测定方法,其中理化分析方法的验证原则与化学制品基本相同,具体验证时还需结合生物制品的特点考虑。生物学测定系指采用生物学方...
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生物学实验室检测安装验证

生物制品质量控制中采用的方法包括理化分析方法和生物学测定方法,其中理化分析方法的验证原则与化学制品基本相同,具体验证时还需结合生物制品的特点考虑。生物学测定系指采用生物学方法,以反映被测物的生物学特性为目的的测定方法。

1)生物学测定常用方法

生物学测定方法可广泛用于各种检测目的,包括鉴别、生物活性和杂质检测等,其中最主要的是生物活性(或效价、效力)测定,生物制品质量控制中经常采用的方法如下。

①以整体动物为试验材料检测制品生物活性(或效力)的动物试验,一般用于成品检定。如动物保护力试验,用于疫苗的效力测定。

②在细胞水平上测定产品的生物活性的细胞测定试验。常用于各种生物制品的活性(效力)测定。这类方法的变异较大。

③利用酶反应速率或免疫相互作用诱导的生物反应等方法测定生物活性的生化检测方法。这类方法的变异相对较小,结果比较准确。

2)生物学检测方法验证的范围

一般情况下,需验证的分析项目有:鉴别试验、纯度和杂质检查、原液或制剂中有效成分的含量测定及生物活性测定。其他质控方法,如必要时也应加以验证。

生物学实验室

3)生物学检测方法验证文件的建立

生物学测定方法验证方案中应包括验证用样品的类型和数量、试验设计(包括组内组间因素)、验证参数和参数的可接受标准以及数据分析规范等内容。

验证用样品从日常检测该项目的样品中随机选择,并确保能代表整体物料的特性。样品制备应在验证序列中单独进行。

生物测定方法中的某些操作因素(温度、酸度、培养时间等)可能导致测量的组间变异,这些因素通常在研发阶段通过实验设计(动物数量、稀释数量、每个稀释度的平行测定、稀释间距等)的可接受标准和数据统计分析来进行评估。试验设计应考虑测量流程的所有变异源因素,包括取样、样品制备、组内和组间因素,使用交叉或嵌套的实验设计来揭示变异的重要来源,保证长期条件下变异具有代表性。

关于验证可接受标准的设定,如果目前存在质量规范的产品,可接受标准应基于测量值可能落在产品规范范围外的风险进行判断和设定。可使用过程能力指数来获悉偏差和中间精密度的边界。中净环球净化可提供生物实验室、微生物实验室、细胞实验室、净化工程等的咨询、规划、设计、施工、安装改造等配套服务。

生物学测定方法验证结果应记录在验证报告中。验证报告应支持方法适用于预期使用目的的结论或指明纠正行动。报告应包括研究的原始数据和统计学运算。验证数据的深入分析包括图解和统计摘要,指出验证参数和他们与目标可接受标准的一致性。

4)生物学检测方法的验证

生物学性质测定方法验证的主要指南包括:

FDA 工业指南  生物制品分析规程及方法验证;

CFDA CDE 生物制品质量控制分析方法验证技术审评一般原则。

①专属性    生物学测定方法的专属性与测定方法及产品组成密切相关所以应从测试原理、测试用材料和供试品组成等方面分析方法的专属性。

如采用免疫印迹试验进行生物制品的鉴别,应首先对所使用抗体的特异性进行分析;若供试品中还存在其他组分,则应进一步验证被检测物中其他物质能否引起非特异性免疫反应。

如采用细胞测定方法检测生物活性,应首先说明被测物质与特定的细胞应答之间的相关性。为表明细胞测定方法的特异性,可进行相关试验进行验证,如加入抗体或特异抑制剂的封闭实验等。如果成品中加入了可能影响活性测定的辅料,应进行相关验证以排除此种影响。

如采用 ELISA 法检测重组产品的残余宿主蛋白含量,可采用与表达体系相同的宿主细胞的蛋白作为免疫原制备抗体,若采用与产品相似工艺进行处理后再免疫动物,则所获得抗体的特异性更好。另外,产品中存在的大量目的蛋白可能影响宿主蛋白的测定,应进行相关验证以排除此种影响。

生物学实验室

②准确度    生物制品的生物学活性为相对活性,一般与同时进行测定的标准品/参考品进行比较而得,所以应对单位有一个适当的定义或以适用的标准品/参考品作为对照经计算而得。为得到准确的测定结果,应注意以下几点。

a.必须同时测定供试品和标准品/参考品的剂量反应曲线,而且两条曲线必须具有平行性。

b.应尽可能使供试品随机分布及保证测试系统的平衡性。需对引起系统偏差的某些因素进行分析排除,如不同的试验平板、平板的不同位置(如边缘效应)、检测次序、动物实验中的笼子效应等。

以相对效价测定方法为例,准确度验证的范围应包括方法日常使用的范围;可信赖的准确度评估需要测定范围内至少3个效价水平,推荐5个效价水平的评估;最常用的方式是通过稀释标准物质或已知效价的样品获取目标标效,这种类型的方法经常被称为稀释线性试验。

③精密度    由于各种生物活性测定方法的变异均较大,所以精密度往往不太理想。

重复性的验证,建议在期望的浓度范围内至少选取三个浓度水平,每个浓度至少应测定5,求得每个浓度水平的精密度。

对于不同测定方法,其精密度可有较大不同,一般情况下,酶法:小于20%;结合试验:小于20%;细胞试验:小于30%:动物试验:小于50%。对于一些尚不成熟的试验方法或某些特殊方法(如珀斑试验),其方法变异可能会更大些。

④线性    线性关系一般是指检测结果与样品含量的直线相关性,而且一般情况下线性关系是定量测定的基础,所以应尽可能摸索出存在较好线性关系的测定方法并进行线性验证。

线性可以直接对标准品、供试品进行测定。为了建立线性关系,建议至少要用5个浓度点,每一浓度测定3次,每次重复测定3份,用这些结果计算响应值与被分析物的浓度的比例关系,或通过定义明确的数学计算形成比例关系。

某些生物活性测定方法线性范围较小(如细胞测定中呈S曲线),采用曲线拟合的方法应更合理。

应提供相关系数、Y轴上的截距、回归线的斜率等数据,还可以分析实测值与回归线的偏差(离散性),以助于对线性作出评价。

⑤范围    具体的范围一般根据检测的目的而设定。验证时所设定的范围应至少包括了产品规范中的范围,如标准中规定成品生物活性应为标示量的80 %120%,则验证的范围可设定为标示量的70%130%

对于生物制品的生物活性测定而言,精密度、线性和范围是非常重要的验证参数。为减少验证工作的繁杂性,可将范围研究与精密度、线性研究合并进行。

⑥耐用性    由于生物学测定结果对分析条件往往比较敏感,所以方法的耐用性验证非常重要,根据具体情况,可针对关键的参数进行耐用性验证。

耐用性是通过有效地改变实验方法的参数,来测定此改变对试验结果的影响,即实验结果不受影响的承受程度。在每种试验条件下,对准确性、精密性或其他参数进行测定,以确定试验方法的耐受或承受能力。在研制阶段即应进行耐用性的评估,它应能表明在方法的参数有微小改变时该分析方法仍然是可靠的。

⑦检测限度和定量限度    对于已建立的杂质检测方法,应进行检测限和定量限验证。检测限和定量限可以通过直观法、信噪比法等测定。

5)案例分析

下表为相对效价测定方法验证案例,仅供参考。

相对效价测定方法验证案例

生物学实验室

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2021-10-25 1412人浏览
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