十万级无菌车间清洁验证

清洁验证相关的方法一般包括取样方法与清洁样品分析方法。取样方法回收率代表了取样设计的适用性和可靠性，而适当的分析方法应能够充分检测相关残留物，检测结果决定清洁程序是否可靠或需要进一步改进。

为了评估清洁效果，有必要对设备的产品接触表面进行取样并确定存在的残留量，适当的取样方法是一个清洁验证计划的基本要素，本节主要描述如何选择适当的取样方法及取样回收率验证问题。

（1）取样方法选择

取样方法的选择取决于残留物的性质、残留限度以及所需要的分析方法，清洁验证常用的取样方法包括:直接表面取样法;淋洗取样法；擦拭取样法;微生物取样法。

擦拭法、淋洗法以及目检都是可以接受的取样方法，这些方法有它们自身的优点与局限，在一个给定的验证方案中，为了充分确认设备清洁是可接受的，可以采用多种取样方法，例如“淋洗取样与目检结合”或者“淋洗取样、擦拭取样以及目检相结合”。

①直接表面取样法    直接表面取样法包括仪器法及目检法，应注意直接表面取样法包括了取样及分析方法。

a.目检法    一个清洁过程应从生产设备表面去除可见残留物，目检存在局限性，如一些设备的表面（如管路）无法直接观察，一些光学设备如镜子或者内窥镜，连同辅助照明一起有助于进行目检。一般来说需要目检的表面应干燥，因为这代表着目检的较差条件。

b.仪器法    仪器法通常采用一个通过光纤由缆连接至分析仪器的表面探针。例如，可能是一个通过光纤电缆连接至傅里叶变换红外光谱仪的衰减全反射探针。这种取样法的优势是不需要像擦拭法和淋洗法那样从表面取残留物进行分析（如擦拭以及淋洗取样）。因此也不需要单独的取样回收率研究。这种方法的主要缺点是光纤探头的长度有限以及被取样表面需相对平坦（因此很多较差条件的位置不能采用这种方法取样）。

②淋洗取样法    淋洗取样法是指在相关设备表面采用流动的溶剂（水、含水溶液、有机溶剂或者水/有机溶剂混合物）去除残留物，然后再检测淋洗液中残留量，淋洗样本的采集应考虑溶解度、位置、淋洗时间以及淋洗体积

③擦拭取样法    拭子以及擦拭取样都采用纤维材料（常用）擦拭表面，擦拭过程中表面的残留物会被转移到纤维材料上。然后冉将纤维材科置于溶剂中，将残留物转移到溶剂中去。然后用经过验证的合适方法分析溶剂中旳残留物。拭子的纤维材料是一种带有塑料把手的纺织物（针织、机织或无纺布)。擦拭巾是机织或无纺布类的纤维材科，用来对表面进行手工取样。用钳子钳住进行表面擦拭的棉球或棉垫是一种特殊尖型的拭子。选择拭子或擦拭巾前需要评估拭子性质，如析出物和脱落物。表面残留物的回收率还取决于拭子头部或擦拭巾的大小和形状以及把手的性质（例如弹性和长度）。

④微生物取样法    生物负载取样可采用淋洗或擦拭法，也可采用接触碟法。应关注擦拭法以及淋洗法中的样品溶液，对于擦拭法应采用无菌溶液，如磷酸盐缓冲液。对于淋洗法，用无菌水对大型设备进行取样一般是不现实的。然而对于小部件的提取取样，首选使用无菌水或无菌溶液。对于大型设备一般选用纯化水或注射用水进行淋洗取样，结果需与同一用水点所取空白对照进行比较。生物负载的淋洗水取样应使用无菌取样容器，为了避免对样品的污染，同洁净室生物负载取样相同，任何微生物取样都需要采用无菌技术。

（2）取样回收率验证

取样回收率验证通常需要证明采用适当的分析方法和取样程序，可充分测量或量化设备表面的残留物。这些研究为残留物测量的取样以及分析方法建立提供了科学依据。它的目的是建立一个可重现的设备表面回收率。以下探讨4种类型的取样回收率：控拭取样回收率、淋洗取样回收率、目检回收率以及生物负裁。对于擦拭以及淋洗取样面言，回收率研究可以作为分析方法验证的一部分，或者一旦确定分析方法能够检测溶减中残留物，可单独讲行研空。取样回收率研究是实验室研究，需要不同被取样设备材质（加不锈钢、玻璃、PTFE 以及 EPDM) 试样，并在上面涂布待检测残留物。

擦拭取样回收率研究中，将已知浓度的残留溶液均匀涂布在材质试样上，自然晾干，采用一定的擦拭方法进行取样，选用合适的溶剂提取棉签上的残留，然后检测提取液中残留物的数量。回收量与材质试样上的加入量之比就是取样百分回收率。由于擦拭属于人工操作，通常每人需要重复3次回收率研究。每个残留物和表面类型的组合至少需要两个人进行擦拭回收率研究。研究建立的回收率可以通过不同的方式定义，但通常定义为任意一个擦拭取样人员的较低平均回收率。一个可接受的拭子回收率取决于如何进行拭子回收率实验。如果在回收率研究确认取样方法时，没有对残留限度或分析结果进行修正，回收率通常要求70%或更高。如果回收率用于修正残留物限度或分析结果，回收率一般要达到50%或以上。

②淋洗取样回收率    淋洗取样回收率研究同擦拭回收率相似，将目标残留物溶液涂布在材质试样上自然晾干。对于擦拭取样的回收率,必须严格执行预定擦拭步骤，与之相反,对于淋洗取样,无法在实验室中准确地重复淋洗步骤（除了提取取样的特殊情况）。然而在实验室中模拟淋洗程序是可行的，在可能的情况下，模拟淋洗的条件应该同实际的设备淋洗条件相同,包括淋洗溶剂以及淋洗溶剂温度的选择。其他情况下,应该选择与设备淋洗相同或较差的淋洗条件，例如回收率研究中溶剂量与被取样表面积之比应该同设备淋洗时相同或更低。

③目检回收率    这个过程实际上是确定一个定量的”目视检测限”。如果目检只是作为擦拭或冲洗取样的补充，则可以但不要求确定“目视检测限”。指定观察条件下的目视检测限可以通过在设备材质试样上涂布不同浓度（ug/cm²）的残留物来确定，并需要一组训练有素的观察者来确定表面残留物明显可见时的较低残留水平。目视检测限的意义在于，如果在清洁验证方案中，在同样（或更严格）的观察条件下确定设备表面已目检洁净，则可认为实际残留水平低于目视检测限。适当的观察条件包括距离、光照以及观察角度。目视检测限取决于残留物性质、表面性质（例如，不锈钢对PTFE) 以及观察者的视力。

④生物负载取样回收率    对于微生物取样，不适合进行回收率研究以确定表面回收率，原因之一是微生物检测的计数问题通常以“菌落形成单位”进行计数而不是单个微生物。第二个原因是在一个标准的取样回收率研究中，当材质试样晾干时微生物会失去生存能力。第三个原因是不清楚选用哪种微生物进行回收率研究。第四个原因是通常生物负载限度已明显低于可能影响产品质量或工艺性能（如在线灭菌）的水平，因此即使回收率低（<50%)，不引入回收因子也不会影响产品质量和/或工艺性能。

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